产品组分

储存条件

常温（10~25℃），保存24个月（避免阳光直射）。

产品简介

XKL-GelRed Ver. 2是一种安全、灵敏、稳定的荧光核酸凝胶染色试剂，适用于琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶上的dsDNA、ssDNA和RNA染色，经过本产品染色的DNA条带在紫外光投射下呈现红色荧光，可以替代溴化乙锭（EtBr）。艾姆斯氏试验结果也表明，该染料的诱变性远远小于溴化乙锭（EtBr），使用更加安全。

XKL-GelRed Ver.2和EB具有相同的光谱特性，不需要更换成像系统，使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可，在300 nm紫外光附近可得到最佳激发。注意XKL-GelRed Ver. 2 Ver. 2不能被488 nm氩离子激光器（如蓝光透射仪）或相似波长的可见光完全激发，因此不推荐使用此类激发装置的成像系统。

产品特点

² 安全无毒：XKL-GelRed Ver. 2独特的油性和大分子量（分子量＞1000）特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内，不易挥发升华，人体不会吸入；

² 灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响较小。样品荧光信号强，背景信号低；

² 稳定性高：适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定，耐光性强；

² 适用范围广：胶染法（电泳前染色）和泡染法（电泳后染色）均可；适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳；可用于dsDNA、ssDNA和RNA染色。

使用方法'

一、胶染法（用法同 EB）

1. 制胶时每50 ml琼脂糖凝胶中加入5 μL XKL-GelRed Ver. 2核酸染料，并充分混匀；（XKL-GelRed Ver. 2核酸染料具有出色的热稳定性，可直接加入高温的凝胶溶液中，无需等待凝胶冷却后再加入，也可采用将XKL-GelRed Ver. 2核酸染料预先与含有琼脂糖粉末的电泳缓冲液混合，加热制成。）

2. 按照常规方法进行电泳；

3. 用302 nm激发的UV凝胶成像系统观察结果。

二．泡染法

1. 按照常规方法进行电泳；

2. 使用0.1 M NaCl溶液稀释XKL-GelRed Ver. 2染液至3×染色液（例如将15 μL XKL-GelRed 水溶液加入50 mL 0.1 M NaCl溶液中）；

3.将凝胶小心地放入合适的容器中，加入足量的3×染色液浸没凝胶，为了缩短泡染时间，染色液可以预先加热至70 ℃左右，然后放入凝胶，孵育10 min即可获得理想效果（若不加热，室温摇床孵育30 min即可，若为丙烯酰胺凝胶，则需孵育30 min到1 h，并随丙烯酰胺含量增加而延长）。泡染染料用量较多，单次使用的染色液可重复使用3次左右。XKL-GelRed Ver. 2染色液可以大量制备，在室温下保存直至用完。

注：①如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。

②如果泡染染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼糖浓度、选用更长的凝胶、延长凝胶时间以保证边缘清晰或改进上样技巧。

4. 用302 nm激发的UV凝胶成像系统观察结果。

注意事项

1. 染料无需低温冷藏，请于室温下储存，避免沉淀。若出现沉淀，请将染料置于45~50 ℃ 2 min，振荡使充分溶解后再使用；

2. 由于XKL-GelRed Ver. 2的高灵敏性，建议减少DNA样品上样量，推荐已知浓度样品的上样量为50~200 ng/泳道；

3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳请使用泡染法。

常见问题与解决办法

Q1：使用胶染法，出现DNA条带弥散、拖尾或弯曲等现象？

A1：

1) 确保使用的染料终浓度为1×；

2) DNA上样量过多。将DNA样品上样量减少至1/3或1/5；

3) 凝胶浓度不合适。检测大片段DNA建议使用低浓度琼脂糖凝胶；

4) 样品中loading buffer过量。loading buffer中的SDS可能会影响电泳效果，建议减少loading buffer用量；

5) 使用合适的电压，建议5~10 V/cm；

6) 使用新鲜的电泳缓冲液。

Q2：使用胶染法发现DNA迁移率存在差异？

A2：

1) 将 DNA 样品上样量减少至1/3或1/5；

2) XKL-GelRed Ver. 2分子量较大，大分子量导致DNA的迁移速率可能受到染料与DNA比率的影响。因此不建议将 XKL-GelRed Ver. 2直接添加到loading buffer中使用，这会导致条带迁移不准确；

3) 可使用泡染法准确确定DNA条带大小。

Q3：ssDNA和RNA染色效果不如dsDNA？

A3：

XKL-GelRed Ver. 2对于dsDNA的灵敏度是ssDNA或RNA的5倍，可适当提高ssDNA或RNA上样量。